弗氏佐剂
基本信息
弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂,分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成,组分比为1~5:1,可根据需要而定,通常为2:1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为3~20mg/ml)或死的结核分枝桿菌,即为弗氏完全佐剂(CFA)。 一般首次注射时用1/2体积CFA加上1/2体积的抗原进行乳化,第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂,则抗原量增大10-20倍。
在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,製备成 "油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化複合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标準和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原2mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行:
(1) 研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于製备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。
(2) 注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,抗原损失少,适用于製备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑胶注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。製备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。
其他物质
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